體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)儀

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>

本試驗(yàn)檢測受試物是否引起培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞染色體畸變，以評價受試物致突變的可能性

實(shí)驗(yàn)概述：

在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下，使培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞暴露于受試物中具有重要意義。用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理，使細(xì)胞停止在中期分裂相，隨后收獲細(xì)胞新技術，制片，染色順滑地配合，分析染色體畸變深入。

大部分的致突變劑導(dǎo)致染色單體型畸變，偶有染色體型畸變發(fā)生前沿技術。雖然多倍體的增加可能預(yù)示著有染色體數(shù)目畸變的可能基礎，但本方法并不適合用于測定染色體的數(shù)目畸變。

應(yīng)用范圍

應(yīng)用于科研多種方式、農(nóng)業(yè)對外開放、衛(wèi)生、教育邁出了重要的一步、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域

符合標(biāo)準(zhǔn)：

GB/T 15670.19-2017《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法第19部分：體外哺乳動物細(xì)胞染色體畸變試驗(yàn)》

二有序推進、試驗(yàn)流程

1）細(xì)胞培養(yǎng)

選擇合適細(xì)胞系，在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期需求。

2）受試物處理

設(shè)置多個濃度組（需包括細(xì)胞毒性評估堅定不移，如50%生長抑制濃度）

陽性對照（已知誘變劑）

陰性對照（溶劑對照）

3）代謝活化系統(tǒng)（S9混合液）

模擬體內(nèi)代謝，用于檢測需代謝激活的致突變物（如加Aroclor 1254誘導(dǎo)的大鼠肝S9）

4）采樣時間

短期處理：1個細(xì)胞周期（通常24小時更讓我明白了，含或不含S9）

長期處理：覆蓋多個細(xì)胞周期（如48小時）

5）染色體制備

秋水仙素（或秋水仙胺）處理：阻斷中期細(xì)胞迎難而上。

低滲處理（KCI溶液）使細(xì)胞膨脹。

固定（甲醇：冰醋酸=3：1）后滴片拓展應用，Giemsa染色生產創效。

6）鏡檢分析

顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率管理。

三優化上下、儀器與試劑

關(guān)鍵儀器：

培養(yǎng)箱、生物安全柜模樣、離心機(jī)生產體系、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析系統(tǒng)）

染色體自動掃描儀（可選）

主要試劑：

細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清很重要。

秋水仙素能力和水平、Giemsa染液、S9混合液異常狀況。